曲黴檢測方法及相關産品概述

發布日期：2022-08-10 閱讀次數：11421 來源：中國(guó)醫(yī)藥報

摘要：

開展曲黴檢測，尤其是曲黴感染早期檢測，對于治療曲黴感染非常重要。傳統實驗室檢測方法往往存在敏感性和特異性較低、幹擾因素較多(duō)等問題。近年來，曲黴核酸檢測技(jì )術在臨床應用(yòng)領域逐漸展現出優勢，目前已有多(duō)個國(guó)産曲黴核酸檢測試劑獲批上市。需要注意的是，曲黴核酸檢測試劑相關技(jì )術指導原則亟待制定，以進一步規範該類産品的開發和申報。

曲黴感染危害大

曲黴是一種條件緻病菌，人體(tǐ)對其有極強的免疫力，因此曲黴隻有在人體(tǐ)免疫功能(néng)降低時才能(néng)緻病。曲黴可(kě)侵犯機體(tǐ)許多(duō)部位，以呼吸系統為(wèi)主，還可(kě)感染眼部、外耳道、皮膚等部位。

直接吸入曲黴孢子是常見的曲黴感染途徑之一。曲黴感染後是否發病、病情的輕重程度與宿主的基礎疾病狀況和免疫功能(néng)狀态密切相關。曲黴感染主要包括3種類型：侵襲性曲黴病、慢性曲黴病和過敏性曲黴病。

侵襲性曲黴病是一種較嚴重的深部真菌感染性疾病。引起侵襲性曲黴病的緻病菌主要包括煙曲黴、黃曲黴、黑曲黴和土曲黴。近年來，随着免疫抑制劑、廣譜抗菌藥的廣泛使用(yòng)，器官移植等侵入性手術的普遍開展，以及惡性腫瘤、獲得性免疫缺陷綜合征患者人數的增加，侵襲性曲黴病發病率呈逐年上升趨勢。目前，該病已成為(wèi)一種較為(wèi)常見的醫(yī)院獲得性真菌感染性疾病，其預後往往較差，死亡率較高。

慢性曲黴病一般指慢性肺曲黴病，是一種複雜且無臨床特異性症狀的肺部疾病，由于常伴有肺結核、非結核分(fēn)枝杆菌感染、肺結節或肺癌等，容易被誤診和漏診。慢性肺曲黴病主要由煙曲黴引起，是一種以肺實質(zhì)緩慢進行性破壞為(wèi)特征的疾病，其表現形式為(wèi)單發或多(duō)發空洞、結節、浸潤或纖維化，伴或不伴曲黴菌球。

過敏性曲黴病以過敏性支氣管肺曲黴病為(wèi)代表，其緻病曲黴以煙曲黴最為(wèi)常見，此外還有黃曲黴、稻曲黴、土曲黴等。過敏性支氣管肺曲黴病較常發生于哮喘患者。值得關注的是，與其他(tā)過敏性疾病常見于兒童不同，過敏性支氣管肺曲黴病在成年人中的發病率較高。過敏性支氣管肺曲黴病常被漏診，通常發展至疾病晚期出現不可(kě)逆結構改變時才被确診。

檢測方法各異

由于曲黴病患者往往同時患有其他(tā)疾病或者不具有特異性症狀，常因沒有接受早期診斷而延誤病情。因此，針對曲黴感染的快速、精(jīng)确檢測十分(fēn)必要。

曲黴感染實驗室檢測方法主要包括顯微鏡檢查、分(fēn)離培養與鑒定、血清學(xué)抗原抗體(tǐ)檢測、聚合酶鏈反應（PCR）等。上述檢測方法的特異性、靈敏度及檢測條件各異，對于曲黴感染臨床診斷具有不同意義。

組織病理(lǐ)學(xué)和無菌部位的真菌培養被認為(wèi)是診斷曲黴病的“金标準”。然而，該類傳統實驗室診斷方法操作(zuò)步驟較多(duō)、耗時較長(cháng)，對樣本取材等操作(zuò)要求較高，在一定程度上缺乏敏感性和特異性，且診斷結果陽性率較低。

半乳甘露聚糖是曲黴細胞壁的組成成分(fēn)。當人體(tǐ)被曲黴感染時，血液和體(tǐ)液中的半乳甘露聚糖含量顯著增高，故可(kě)通過檢測其濃度進行曲黴感染的早期診斷。美國(guó)感染病學(xué)會于2016年發布的《曲黴菌病診治指南》（以下簡稱《指南》）顯示，對于血液系統惡性腫瘤及造血幹細胞移植患者，建議将血清和肺泡灌洗液中的半乳甘露聚糖作(zuò)為(wèi)侵襲性曲黴病的精(jīng)确診斷标志(zhì)物(wù)。

曲黴菌特異性免疫球蛋白E（IgE）或總IgE可(kě)作(zuò)為(wèi)過敏性曲黴菌病的診斷指标。在治療過程中，可(kě)對總IgE水平進行動态監測，用(yòng)以指導藥物(wù)使用(yòng)。

煙曲黴血清沉澱素或特異性免疫球蛋白G（IgG）對于過敏性支氣管肺曲黴病診斷的特異性不高。不過，如果患者體(tǐ)内出現高滴度的曲黴特異性IgG抗體(tǐ)，同時伴有胸膜纖維化或持續性肺部空洞形成，則提示其患有慢性肺曲黴病。

近年來，随着分(fēn)子生物(wù)學(xué)技(jì )術的迅速發展，PCR技(jì )術逐漸廣泛應用(yòng)于臨床上針對多(duō)種病原微生物(wù)的檢測場景。該技(jì )術靈敏度較高，特異性較好，具有良好的臨床應用(yòng)前景，尤其在曲黴感染早期檢測方面具有明顯優勢。《指南》建議，有條件的實驗室可(kě)選擇分(fēn)子生物(wù)學(xué)檢測方法用(yòng)于曲黴病診斷。然而，由于該方法尚缺乏結論性驗證證據，目前還需要結合其他(tā)診斷結果和臨床表現進行綜合判斷。

已批準曲黴檢測試劑概況

目前，我國(guó)已獲批上市的曲黴檢測試劑的檢測類别主要包括抗原、抗體(tǐ)和核酸三類（詳見表）。其中，以過敏原特異性IgE抗體(tǐ)檢測試劑和曲黴抗原/IgG抗體(tǐ)檢測試劑居多(duō)，兩者的管理(lǐ)類别分(fēn)别為(wèi)Ⅱ類和Ⅲ類，均使用(yòng)血清樣本進行檢測。

從檢測方法來看，已獲批曲黴檢測試劑以酶聯免疫法居多(duō)。該方法敏感性較高、特異性較強，操作(zuò)簡便，其檢測結果肉眼可(kě)觀察，既可(kě)用(yòng)于檢測抗體(tǐ)，又可(kě)用(yòng)于檢測抗原，且易于實現大規模、自動化檢測。需要注意的是，在實際檢測過程中，酶聯免疫法存在幹擾因素較多(duō)等問題，容易出現假陽性或假陰性結果。

值得關注的是，目前已有基于熒光PCR法的國(guó)産曲黴核酸檢測試劑獲批上市。該方法使用(yòng)痰液樣本，敏感性和特異性均較強，在曲黴感染早期檢測方面具有明顯優勢。

然而，曲黴核酸檢測類産品目前普遍存在以下問題：診斷标準尚不明确；産品性能(néng)驗證方法不合理(lǐ)、驗證内容不全面；注冊申請人在陽性判斷值的建立方法、臨床判斷曲黴病的“金标準”、最低檢出能(néng)力的評價、企業參考品設置等方面認識不統一等。

由此可(kě)見，曲黴核酸檢測試劑相關技(jì )術指導原則需要盡快制定，通過建立更加科(kē)學(xué)、專業的審評依據，提升注冊申請人對該類産品的認知度，從而進一步規範曲黴核酸檢測類産品的申報材料，更好地為(wèi)相關産品開發提供技(jì )術指導。